免疫学检验—整理笔记

免疫学检测法

免疫学检测技术的用途非常广泛，它们可用于有关免疫疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。如对传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺损病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应肿瘤的免疫学检测，对诊断、治疗均有很大帮助。此外在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、定量检查不仅推动了对各种免疫学现象的研究，而且扩大免疫学与医学生物许多领域的联系。本章仅介绍常用免疫学检测方法的原理，简要过程和实用意义。

第一节 抗原或抗体的检测

一、检测的原理

借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。

1. 抗原与抗体的亲和力(affinity)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合。抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。空间构型互补程度不同，抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。互补程度高，则亲和力强。此外，反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响，抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。高亲合力的抗体与抗原的结合力强，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。

2. 抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。定性和定位检测比较简单，即用已知的抗体和待检样品混合，经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生，就说明待检样品中有相应的抗原存在。若无预期的现象发生，则说明样品中无相应的抗原存在。同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。

对抗原或抗体进行定量检测时，以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。

（1）根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原（或抗体）的含量：在一定的反应条件下，加入的已知抗体（或抗原）的浓度一定，反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原（或抗体）量成正比。也就是抗体浓度一定时，免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。可用实验性标准曲线推算出样品中抗原（或抗体）的含量。如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于这类方法。

（2）抗原或抗体效价滴定的原理：当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时，就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。在实际工作中，把浓度低的反应成分（抗原或抗体）的浓度固定，把浓度高的另一种反应成分作一系列稀释。例如用人血清作抗原免疫 3 只家兔，比较 3 只家兔产生抗体的多少，即滴定 3 只兔血清抗体效价，可用双向琼脂扩散法来滴定，例如将抗体浓度固定，将抗原作不同的稀释度，分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中，观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度（如甲兔的抗体效价为 1/2000，而丙免的是 1/8000 则可比较出后者比前者产生抗体的效价要高）。也就是表示效价的稀释度越高，样品中所含待检成分越多。因人血清（抗原）和抗体（免疫兔血清）相比，浓度高，故应稀释抗原。

二、抗原或抗体检测的实用意义

1. 抗体检测的意义检测抗体可用于评价人和动物免疫功能的指标。抗体用于临床治疗或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。临床上检测病人的抗病原生物的抗体、抗过敏原的抗体、抗 HLA 抗原的抗体、血型抗体及各种自身抗体，对有关疾病的诊断有重要意义。

2. 抗原检测的意义可做为抗原进行检测的物质可分为以下四类：

（1）各种微生物及其大分子产物：用于传染病诊断、微生物的分类及鉴定以及对菌苗、疫苗的研究。

（2）生物体内各种大分子物质：包括各种血清蛋白（如各类免疫球蛋白、补体的各种成分）、可溶性血型物质、多肽类激素、细胞因子及癌胚抗原等均可做为抗原进行检测。在对这些成分的生物学作用的研究以及各种疾病的诊断有重要意义。

（3）人和动物细胞的表面分子：包括细胞表面各种分化抗原（如 CD 抗原）、同种异型抗原（血型抗原或 MHC 抗原）、病毒相关抗原和肿瘤相关性情抗原等。检测这些抗原对各种细胞的分类、分化过程及功能研究、对各种与免疫有关的疾病的诊断及发病机制的研究，均有重要意义。

（4）各种半抗原物质：某些药物、激素和炎症介质等属于小分子的半抗原，可以分别将它们偶联到大分子的载体上，组成人工结合的完全抗原。用其免疫动物，制备出各种半抗原的抗体，应用于各种半抗原物质的检测，例如对某些病人在服用药物后进行血中药物浓度的监测。对运动员进行服用违禁药品的检测，都是应用半抗原检测的方法。

1. 抗原与抗体的亲和力(affinity)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合。抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。空间构型互补程度不同，抗原和抗体分子之间

2. 抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。定性和定位检测比较简单，即用已知的抗体和待检样品混合，经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生，就说明待检样品中有相应的抗
   对抗原或抗体进行定量检测时，以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。

   （1）根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原（或抗体）的含量：在一定的反应条件下，加入的已知抗体（或抗原）的浓度一定，反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原（或抗体）量成正比。也就是抗体浓度一定时，免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。可用实验性标准曲线推算出样品中抗原（或抗体）的含量。如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于这类方法。

   （2）抗原或抗体效价滴定的原理：当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时，就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。在实际工作中，把浓度低的反应成分（抗原或抗体）的浓度固定，把浓度高的另一种反应成分作一系列稀释。例如用人血清作抗原免疫 3 只家兔，比较 3 只家兔产生抗体的多少，即滴定 3 只兔血清抗体效价，可用双向琼脂扩散法来滴定，例如将抗体浓度固定，将抗原作不同的稀释度，分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中，观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度（如甲兔的抗体效价为 1/2000，而丙免的是 1/8000 则可比较出后者比前者产生抗体的效价要高）。也就是表示效价的稀释度越高，样品中所含待检成分越多。因人血清（抗原）和抗体（免疫兔血清）相比，浓度高，故应稀释抗原。

   二、抗原或抗体检测的实用意义

3. 抗体检测的意义检测抗体可用于评价人和动物免疫功能的指标。抗体用于临床治疗或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。临床上检测病人的抗病原生物的抗体、抗过敏原的抗体、抗 HLA 抗原的抗体、血型抗体及各种自身抗体，对有关疾病的诊断有重要意义。

4. 抗原检测的意义可做为抗原进行检测的物质可分为以下四类：
   （1）各种微生物及其大分子产物：用于传染病诊断、微生物的分类及鉴定以及对菌苗、疫苗的研究。

   （2）生物体内各种大分子物质：包括各种血清蛋白（如各类免疫球蛋白、补体的各种成分）、可溶性血型物质、多肽类激素、细胞因子及癌胚抗原等均可做为抗原进行检测。在对这些成分的生物学作用的研究以及各种疾病的诊断有重要意义。

   （3）人和动物细胞的表面分子：包括细胞表面各种分化抗原（如 CD 抗原）、同种异型抗原（血型抗原或 MHC 抗原）、病毒相关抗原和肿瘤相关性情抗原等。检测这些抗原对各种细胞的分类、分化过程及功能研究、对各种与免疫有关的疾病的诊断及发病机制的研究，均有重要意义。

   （4）各种半抗原物质：某些药物、激素和炎症介质等属于小分子的半抗原，可以分别将它们偶联到大分子的载体上，组成人工结合的完全抗原。用其免疫动物，制备出各种半抗原的抗体，应用于各种半抗原物质的检测，例如对某些病人在服用药物后进行血中药物浓度的监测。对运动员进行服用违禁药品的检测，都是应用半抗原检测的方法。

   三、抗原或抗体检测的方法

   由于各种检测方法中所用的抗原性状不同，出现结果的现象也不同。最广泛应用方法有下述几种：

   （一）沉淀反应

   可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时，可形成较大的不溶性免疫复合物。在反应体系中出现不透明的沉淀物，这种抗原抗体反应称为沉淀反应（precipitation n eaction）。

5. 环状沉淀试验　先将含抗体的未稀释的免疫血清加到直径小于 0.5cm 的小试管底部。将稀释的含有可溶性抗原的材料重叠于上，让抗原与抗体在两液体的界面相遇，形成白色免疫复合物沉淀环，故名为环状沉淀试验（ring precipitation te

6. 单向免疫扩散试验　单向免疫扩散试验（single immunodiffusion）是在凝胶中进行的沉淀反应。将抗体混入加热溶解的琼脂中，倾注于玻片上，制成含有抗体的琼脂板，在适当位置打孔，将抗原材料加入琼脂板的小孔内，让抗原从小孔向四周的琼
   1，常用于定量测定人或动物血清 IgG、IgM、IgA 和 C3 等，其缺点是需 1～2 天才能看结果（图 20-1）

1.

与特异性细胞免疫有关的主要细胞是: A、T 细胞　　B、浆细胞　　C、B 细胞　　D、Mφ 细胞　　E、NK 细胞

答案：A

2.

属于中枢免疫器官的是（　　） A、扁桃体　　B、淋巴结　　C、胸腺　　D、脾脏　　E、肠淋巴组织

答案：C

3.

抗原应具有的两个性质是: A、致病性和免疫原性　　B、变应原性和免疫原性　　C、毒性和免疫原性 D、毒性和反应原性　　E、免疫原性和抗原性

答案：E

4.

半抗原（　　） A、是大分子物质　　　　B、通常是蛋白质　　　　C、只有免疫原性 D、只有反应原性　　　　E、只有与载体结合后才能和相应抗体结合

答案：D

5.

O 型血人的红细胞上有: A、A 抗原　　B、B 抗原　　C、AB 抗原　　D、无任何抗原　　E、H 物质

答案：D

6.

兄弟姐妹间进行器官移植引起排斥反应的物质称为（　　） A、异种抗原　　B、同种异体抗原　　C、自身抗原　　D、异嗜性抗原　　E、超抗原

答案：B

7.

属于 TI-Ag 的物质是: A、外毒素　　B、肺炎球菌荚膜多糖　　C、牛血清白蛋白　　D、羊红细胞　　E、卵白蛋白

答案：B

8.

抗体与抗原结合的部位是（　　） A、CH 区　　B、VH 区　　C、CL 区　　D、VL 区　　E、VH 与 VL

答案：E

9.

能与肥大细胞结合的 Ig 是（　　） A、IgA　　B、IgD　　C、IgE　　D、IgM　　E、IgG

答案：C

10.

天然 ABO 血型抗体是（　　）

A、IgA 类抗体 B、IgM 类抗体 C、IgG 类抗体 D、IgD 类抗体 E、IgE 类抗体

答案：B

11.

关于 IgE 的正确描述是（ ）

A、介导I型超敏反应 B、能通过胎盘 C、由黏膜上皮细胞产生 D、有补体结合点 E、具有调理作用

答案：A

12.

主要在黏膜局部抗感染的 Ig 是（ ）

A、IgG B、IgM C、IgE D、IgD E、SIgA

答案：E

13.

补体经典途径激活顺序是（ ）

A、C123456789 B、C124536789 C、C145236789

D、C142356789 E、C124356789

答案：D

14.

活化 T 淋巴细胞表达哪类 MHC 分子（ ）

A、只表达 MHC-II 类分子 B、只表达 MHC-I 类分子 C、同时表达 MHC-I、II 类分子

D、同时表达 MHC-I、III 类分子 E、同时表达 MHC-II、III 类分子

答案：C

15.

决定抗原特异性的是（ ）

A.异种物质 B.大分子物质 C．胶体物质 D.抗原决定簇 E.抗原的载体部分

答案：D

16.

下列哪些与ELISA（双抗体夹心法）无关（ ）

A.包被抗体 B.酶标抗体 C.相应酶底物 D.荧光染料 E.终止反应物

答案：D

17.

关于分泌型IgA的错误解释是（ ）

A.粘膜上皮细胞产生的 B.分泌液中的主要抗体 C.不能通过胎盘

D.无补体结合点 E.不能结合细胞

答案：A

18.

由于血型错误的输血引起的溶血反应主要是（ ）

A.细菌毒素作用 B.反应素 C.补体作用 D.凝集素作用 E.溶血素作用

答案：C

19.

下述哪种反应必须有补体参加（ ）

A.溶菌反应 B.凝集反应 C.沉淀反应 D.间接凝集反应 E.毒素抗毒素中和反应

答案：A

20.

关于体液免疫，下列哪项是错误的（ ）

A.接受抗原刺激后产生的 B.以B细胞活动为主 C.存在于血清及其它体液中

D.浆细胞合成和释放Ig E.参与结核杆菌等的抗感染免疫

答案：D

21.

关于记忆细胞的正确理解是（　　） A.能接受抗原再刺激　　B.可生存数月至数年　　C.参加淋巴细胞的再循环 D.再次遇到相同抗原时能迅速转化增殖和分化　　　E.以上都是

答案：D

22.

能产生淋巴因子的主要细胞是（　　） A. B细胞　B. T细胞　C. 数突状细胞　D. NK细胞　E. 单核细胞

答案：B

23.

下列物质哪种不属于免疫应答的产物（　　） A.白喉抗毒素　B.抗“O”抗体　C.抗生素　D.转移因子　E.免疫球蛋白

答案：C

24.

OKT系统和Leu系统单克隆抗体用来（　　） A.检测中性粒细胞　　B.进行B细胞亚群分类　　C.进行T细胞亚群分类 D.检测单核吞噬细胞的特性　E.检测K细胞的特性

答案：C

25.

MHC 是指（　　） A、染色体上编码组织相容性抗原一组紧密连锁的基因群 B、染色体上编码次要组织相容性抗原的一组紧密连锁的基因群 C、染色体上编码移植抗原的一组紧密连锁的基因群 D、染色体上编码主要组织相容性抗原的一组紧密连锁的基因群 E、染色体上一组基因群

答案：D

1.

免疫是指（　　） A、机体抗感染的过程　　　B、机体识别和排除抗原性异物的过程 C、机体对病原微生物的防御过程　　D、机体清除自身衰老死亡细胞的过程 E、机体清除自身突变细胞的能力

答案：B

2.

与特异性细胞免疫有关的主要细胞是: A、T 细胞　　B、浆细胞　　C、B 细胞　　D、Mφ 细胞　　E、NK 细胞

答案：A

3.

属于中枢免疫器官的是（　　） A、扁桃体　　B、淋巴结　　C、胸腺　　D、脾脏　　E、肠淋巴组织

答案：C

4.

抗原应具有的两个性质是: A、致病性和免疫原性　　B、变应原性和免疫原性　　C、毒性和免疫原性 D、毒性和反应原性　　E、免疫原性和抗原性

答案：E

5.

半抗原（　　） A、是大分子物质　　　　B、通常是蛋白质　　　　C、只有免疫原性 D、只有反应原性　　　　E、只有与载体结合后才能和相应抗体结合

答案：D

6.

O 型血人的红细胞上有: A、A 抗原　　B、B 抗原　　C、AB 抗原　　D、无任何抗原　　E、H 物质

答案：D

7.

兄弟姐妹间进行器官移植引起排斥反应的物质称为（　　） A、异种抗原　　B、同种异体抗原　　C、自身抗原　　D、异嗜性抗原　　E、超抗原

答案：B

8.

属于 TI-Ag 的物质是: A、外毒素　　B、肺炎球菌荚膜多糖　　C、牛血清白蛋白　　D、羊红细胞　　E、卵白蛋白

答案：B

9.

抗体与抗原结合的部位是（　　） A、CH 区　　B、VH 区　　C、CL 区　　D、VL 区　　E、VH 与 VL

答案：E

10.

能与肥大细胞结合的 Ig 是（　　） A、IgA　　B、IgD　　C、IgE　　D、IgM　　E、IgG

答案：C

11.

天然 ABO 血型抗体是（　　）

A、IgA 类抗体 B、IgM 类抗体 C、IgG 类抗体 D、IgD 类抗体 E、IgE 类抗体

答案：B

12.

关于 IgE 的正确描述是（ ）

A、介导I型超敏反应 B、能通过胎盘 C、由黏膜上皮细胞产生 D、有补体结合点 E、具有调理作用

答案：A

13.

主要在黏膜局部抗感染的 Ig 是（ ）

A、IgG B、IgM C、IgE D、IgD E、SIgA

答案：E

14.

补体经典途径激活顺序是（ ）

A、C123456789 B、C124536789 C、C145236789

D、C142356789 E、C124356789

答案：D

15.

活化 T 淋巴细胞表达哪类 MHC 分子（ ）

A、只表达 MHC-II 类分子 B、只表达 MHC-I 类分子 C、同时表达 MHC-I、II 类分子

D、同时表达 MHC-I、III 类分子 E、同时表达 MHC-II、III 类分子

答案：C

16.

决定抗原特异性的是（ ）

A.异种物质 B.大分子物质 C．胶体物质 D.抗原决定簇 E.抗原的载体部分

答案：D

17.

下列哪些与ELISA（双抗体夹心法）无关（ ）

A.包被抗体 B.酶标抗体 C.相应酶底物 D.荧光染料 E.终止反应物

答案：D

18.

关于分泌型IgA的错误解释是（ ）

A.粘膜上皮细胞产生的 B.分泌液中的主要抗体 C.不能通过胎盘

D.无补体结合点 E.不能结合细胞

答案：A

19.

由于血型错误的输血引起的溶血反应主要是（ ）

A.细菌毒素作用 B.反应素 C.补体作用 D.凝集素作用 E.溶血素作用

答案：C

20.

下述哪种反应必须有补体参加（ ）

A.溶菌反应 B.凝集反应 C.沉淀反应 D.间接凝集反应 E.毒素抗毒素中和反应

答案：A

21.

关于体液免疫，下列哪项是错误的（ ）

A.接受抗原刺激后产生的 B.以B细胞活动为主 C.存在于血清及其它体液中

D.浆细胞合成和释放Ig E.参与结核杆菌等的抗感染免疫

答案：D

22.

关于记忆细胞的正确理解是（　　） A.能接受抗原再刺激　　B.可生存数月至数年　　C.参加淋巴细胞的再循环 D.再次遇到相同抗原时能迅速转化增殖和分化　　　E.以上都是

答案：D

23.

能产生淋巴因子的主要细胞是（　　） A. B细胞　B. T细胞　C. 数突状细胞　D. NK细胞　E. 单核细胞

答案：B

24.

下列物质哪种不属于免疫应答的产物（　　） A.白喉抗毒素　B.抗“O”抗体　C.抗生素　D.转移因子　E.免疫球蛋白

答案：C